菌落总数检测方法视频教程（菌落总数检测方法视频）
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1、平皿计数法菌落总数(standardplate-countbacteria):水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。
2、仪器和装置高压蒸汽灭菌器。
3、干热灭菌箱。
4、培养箱(36±1)℃。
5、电炉。
6、冰箱。
7、放大镜或菌落计数器。
8、pH计或精密pH试剂。
9、灭菌试管。
10、平皿直径9cm。
11、培养基与试剂营养琼脂成分蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂10～20g、蒸馏水1000mL。
12、制法将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中(如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经103.43kPa(121℃)灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
13、检验步骤1)水样处理。
14、a.饮用水。
15、以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入来菌平皿中，倾注约15mL已熔化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养充分混匀。
16、每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
17、待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于(36±1)℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为1mL水样中的菌落总数。
18、b.水源水。
19、以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶10稀释液。
20、吸取1mL1∶10的稀释液注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶100稀释液。
21、按同法依次稀释成1∶1000、1∶10000稀释液等备用。
22、如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。
23、用灭菌吸管取未稀释的水样和2～3个适宜稀释度的水样各1mL，分别注入灭菌平皿内。
24、以下操作同生活饮用水的检验步骤。
25、2)菌落计数及报告方法。
26、作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
27、在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
28、在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
29、若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。
30、然后再求该稀释度的平均菌落数。
31、不同稀释度的选择及报告方法:首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例1)。
32、若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定。
33、若其比值小于2应报告两者的平均数(如表82.2中实例2)。
34、若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数(如表82.2中实例3)。
35、若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见表82.2中实例4)。
36、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例5)。
37、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例6)。
38、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例7)。
39、若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。
40、如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿度面积63.6cm2，再乘其稀释倍数作报告。
41、菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字;在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。
42、为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表82.2“报告方式”栏)。
43、表82.2 稀释度选择及菌落总数(CFU)报告方式。
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